LSCM被分类为扫描显微镜,使用激光束作为探针。其原理如图所示,一束平行激光束在入口孔聚焦后,通过物镜进···
LSCM被分类为扫描显微镜,使用激光束作为探针。其原理如图所示,一束平行激光束在入口孔聚焦后,通过物镜进一步聚焦到样品上的一个小点,散射光由同一物镜收集,再次聚焦,但现在在放置在入口孔共焦位置的出口狭缝处。通过共焦孔的光由光传感器检测。样品的光可能是焦点处物质的荧光。重要的是,共焦出口孔拒绝来自焦点以外样品点的光,从而大大减少了杂散背景光。如果我们相对于物镜横向扫描样品,我们可以在屏幕上获得二维图像。应指出,由于光衍射效应,点分辨率被限制在亚波长(几百纳米),但当小物体散射或发射人眼可见或光传感器可检测的光时,它们可以显示为亮点。这意味着如果分子之间的距离足够大,即使是单个分子的信号也可以被检测到。LSCM的一个缺点是由于其扫描性质,图像获取时间较长。
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